Assisted hatching法の違いが胚盤胞の接着能に及ぼす影響 の検討
2017年度 学術集会 一般演題（口頭発表）
発表者：江副 賢二・上野 智・薮内 晶子・沖村 匡史・内山 一男・小林 保・加藤 恵一
加藤レディスクリニック
Abstract
【目的】
Assisted hatching（AH）はレーザー照射により透明帯を部分的に除去する手法が一般的であるが，透明帯の部分除去がAHとして適切であるか否かは明白ではない．
本実験では，胚盤胞の接着能を体外培養系で評価することを目的として，透明帯を部分除去または完全除去した胚盤胞のOutgrowth 現象について比較した．
また，胚盤胞の接着時にヘテロダイマーを形成しFibronectinと結合することが報告されているIntegrinα5及びβ1の mRNA発現を解析した．
【方法】
研究への使用に同意が得られた患者の廃棄凍結胚盤胞（n=217）を実験に供した．
胚盤胞は融解後，レーザー照射により透明帯の30-40%を部分的に除去し，一部は次いでピペッティング処理により透明帯を完全に除去した（P 群，n=79，C 群，n=79）．
また融解後に処置を行わない胚盤胞を対照群とした（Intact 群，n=59）．胚盤胞はFibronectin 処理を施したディッシュで96時間培養し，タイムラプスシステムにより胚盤胞の孵化率，接着率およびOutgrowth面積を評価した．
さらに，培養開始0，12，18，24時間後の胚盤胞よりRNAを抽出し，qRT-PCR によりIntegrin α5及びβ1のmRNAの発現を解析した．
【結果】
P群の孵化率は64%であり，Intact群（10%）と比較し有意に高率であった．
P，C およびIntact 群における胚盤胞のディッシュへの接着率は，それぞれ60%，80%および10%であり，C 群が有意に高かった．
またC 群の接着に要する時間はP 群およびIntact 群に比べて有意に短かった．
Outgrowth 面積は，P 群で2.1×105μm2，C 群で3.5×105μm2，Intact群で1.1×105μm2であり，C 群で有意に増加した．
さらに，C 群において，培養開始12時間後にIntegrin α5のmRNA発現量の増加が認められ，24時間後まで漸増がみられた．
一方，P 群およびIntact 群においてもIntegrin α5のmRNA発現量の増加がみられたが，その発現量はC 群と比較し有意に低かった．
またC群では培養開始24時間後までIntegrinβ1のmRNA 発現量の継続的な増加が認められたが，P 群およびIntact 群においては変化がみられなかった．
【考察】
透明帯の部分除去後においても孵化しない胚盤胞がみられ，透明帯の部分除去はAHの手法として不十分である可能性が示唆された．
一方で，透明帯の完全除去は胚盤胞におけるIntegrin α5及びβ1の発現を亢進し，Fibronectin 処理をしたディッシュへの接着を促進することが明らかとなった．
これより，胚盤胞へのAHの手法として透明帯の完全除去が有用である可能性が示唆された．
