胚盤胞における胚生検(biopsy) 方法の違いが受精卵に与える影響 についての検討
2016年度 学術集会 一般演題（口頭発表）
発表者：松浦 まき・大月 純子・向井 美紗・後藤 優介・辻 優大・古橋 孝祐・岩﨑 利郎・苔口 昭次・塩谷 雅英
英ウィメンズクリニック
Abstract
【目的】
着床前スクリーニング（PGS）は染色体の数的異常の検出を目的に，海外では広く取り入れられており，①精液所見不良，②高齢妊娠，③着床不全，④反復流産，ならびに⑤卵巣予備能が低下している患者への適応が推奨されている （PGDIS conference 2016）．一方，わが国では技術の安全性，有効性などについて検討を行う臨床研究の段階とされている．このように，PGSを一般的な不妊治療の手法として用いるためには，倫理的な議論とは別に，技術の安全性確立が不可欠である．特に胚生検 （biopsy） 技術は診断を左右する重要な技術といえる．現在，biopsyを行う上で主流となっている方法は，レーザーを用いた手法であるが，同時にレーザーによる周辺細胞への影響も懸念される．そこで本検討では，安全で簡便なbiopsy 法の技術確立を目的に，異なる2種のbiopsy 法について比較検討を行ったので報告する．
【方法】
研究使用に同意が得られた廃棄予定の凍結胚盤胞 （Day5, G3BB≦）を対象に，融解後に孵化が認められた15個の胚盤胞を検討に用いた．検討群として，従来通りの方法で胚盤胞の孵化部分をレーザーによりbiopsyを行ったレーザー群，ならびにレーザーを使用せずに孵化部分を物理的に切り取ったメカニカル群の2群を用いた．次いで，各群から得られたbiopsy後の細胞（ 胚盤胞本体，およびbiopsyサンプル） に対し，細胞蛍光染色法を用いた死細胞の割合について比較検討を行った．なお，染色には細胞膜透過性を有するHoechst33342（青色；総細胞），ならびに細胞膜透過性を有さないpropodium iodide（赤色；死細胞）を用いた．
【結果】
Biopsy 後の胚盤胞本体の細胞数ならびにbiopsy サンプル数はレーザー群 （n=10） ならびにメカニカル群 （n=12） に差は認められなかった（72.5±15.6 vs 81.8±14.5，ならびに6.4±2.2 vs 2.5±1.4）．同様に，biopsy 後の胚盤胞本体における死細胞の割合（6.9% vs 5.6%；p=0.68），ならびにbiopsy サンプルにおける死細胞の割合（50.0%vs42.1%；p=0.31）にそれぞれ差は認められなかった．
【考察】
本検討結果から，レーザー法とメカニカル法によるbiopsyにおいて，胚盤胞本体あるいはbiopsy サンプルに対する細胞損傷の割合に差はないことが示された．メカニカル法はレーザーを使用する必要がないため，レーザーを所持していない施設でも胚盤胞期におけるbiopsyが可能になるのではないかと考えられた．今後，より詳細な検討を重ね，安全で簡便な技術の確立を目指していきたい．
